课 程 名 称

生物检测技术实践

课程性质

专业基础

实验技术人员

王世强、王东浩

职       称

实验师

授 课 方 式

多媒体辅助教学

考试方式

实验操作及实验报告

教          材

--

出 版 社

--

年 级

2016级

授课

专业

生物技术

人数

76

学 时

36

周学时

3

周

日  期

实验内容及所用药品和仪器

教 师

第3周

9.17-9.23

实验1  PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌（基础实验）

实验目的：

掌握PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌具体方法及操作步骤。

实验仪器及耗材、试剂：

1．耗材和试剂：菌种：Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)－26003-21；乳制品：全脂乳、脱脂乳和奶酪；营养肉汤培养基；10xPCR   buffer、dNTPs、TaKaRa Taq、DNA Marker DL2000，

；引物： 正向引物：GCGATTGATGGTGATACGGTT            

反向引物：AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC  

2．实验仪器：PCR仪、DXY-33A型电泳仪、UVIpro凝胶成像系统

牛俊峰

王世强

王东浩

第4周

9.24-9.30

实验2  ELISA方法快速检测肉制品中的沙门氏菌（基础实验）

实验目的：

掌握ELISA方法快速检测肉及肉制品中的沙门氏菌的具体方法及操作步骤。

实验仪器及耗材、试剂：

1．耗材和试剂：包被缓冲液：碳酸盐缓冲液（pH9.6 , 0.1M）；稀释液 PBS(Ph7.4, 0.15M )； Tween 20；洗涤液：NaCl -Tween底物溶液：磷酸盐-柠檬酸缓冲液（pH5.0）；封闭液：0.2% BSA溶液；沙门氏菌血清；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体；终止剂 ：2M 硫酸；ELISA板；人工污染沙门氏菌的香肠制品一份，ELISA试剂盒

2．实验仪器：酶标检测仪，移液枪

牛俊峰

王世强

王东浩

第6周

10.08-10.14

实验3 面膜制品制样及荧光剂的检测（基础实验）

实验目的：

掌握伍德灯照射法和分光光度法检测面膜类制品中荧光增白剂的含量。

实验仪器及耗材、试剂：

1．市售各种面膜样品、二苯乙烯性荧光增白剂VBL,CXT和BA标品、荧光染色剂0.1% Calcofluor White Stain；盐酸、氢氧化钠

2. 海伍德紫外灯、荧光性分光光度计、超纯水仪。

牛俊峰

王世强

王东浩

第7周

10.15-10.21

实验4化妆品中重金属含量的检测（基础实验）

实验目的：

熟悉及掌握化妆品中铍、铬、砷、镉、碲、钕、铊、铅等有害元素的测定方法。

实验仪器及耗材、试剂：

1.钇、钕元素标准溶液（1000 μｇ/ｍＬ）；铟、铋、碲元素标准溶液 （100 μｇ/ｍＬ）；锂元素标准溶液（1000 μｇ/ｍＬ）；多元素标准溶液（100.0μｇ/ｍＬ）；硝酸（优级纯）；过氧化氢（30%，优级纯）；分析用水（超纯水）；待抽查样品。

2.电感耦合等离子体质谱仪（赛默飞世尔科技）；MARS型微波消解仪；电子分析天平；比色管（５０ｍＬ）。

牛俊峰

王世强

王东浩

第8周至第9周

10.22-11.04

 实验5  激素处理前后植物中游离氨基酸的含量检测

实验6 牛奶中黄曲霉素M1、M2的测定

实验目的：

(1) 掌握氨基酸分析仪的检测原理；掌握植物样品中游离氨基酸的提取方法和注意事项；掌握样品处理的基本原则和方法；了解氨基酸分析仪的操作；了解激素对植物代谢的影响；掌握数据的显著性差异分析方法。

(2) 掌握QQQ LC-MS的检测原理；掌握检测分析中混标的配制方法；掌握样品处理中的固相微萃取原理和方法；了解QQQ LC-MS的操作。

实验仪器及耗材、试剂：

1．标样:Type H、TypeB、Type AN-Ⅱ氨基酸混标( 日本和光纯)、茚三酮、水杨酸、丹参种子；黄曲霉素M 1 和 黄曲霉素 M 2标样各1支，乙腈（色谱纯，Merk）4L、甲醇（色谱纯，Merk）4L、乙酸铵（色谱纯，sigma）；

2. 2mL注射器、0.22um滤膜，预开口进样瓶。10mL 容量瓶，C 18 柱(柱长 100mm ,柱内径 2. 1mm ,填料粒径 1. 7 μ m )，棕色进样瓶，1mL注射器，0.22um尼龙滤膜，免疫亲和小柱(柱容量 ≥100ng )，10mL刻度试管，50mL 的注射器筒， 固相萃取装置2套，真空泵2个。

牛俊峰

王世强

王东浩

第10周至第15周

11.05-12.16

实验7 植物中多糖、生物碱、挥发油的提取分离与鉴定

实验8 “药食同源”养生茶类、酒类开发

实验9 白及系列美妆化妆品的开发

实验目的：

(1) 熟悉并掌握植物中多糖类、生物碱类和挥发油类物质的提取、分离和鉴定方法。

(2) 熟悉并掌握“药食同源”中药材的种类及特性，了解茯茶类、普洱茶类及黄酒类的生产工艺，优化“药食同源”中药材与茶类、酒类生产工艺。

(3) 熟悉并掌握白及有效成分的提取，了解面膜、牙膏等生产工艺，进一步进行面膜、牙膏等生产工艺的优化。

实验仪器及耗材、试剂：

1.试剂及耗材：黄精药材、无水乙醇、石油醚、乙酸酐、乙酸、氯仿、硼氢化钠、三氟乙酸、无水硫酸钠、甲醇、   浓硫酸、苯酚，超纯水，重蒸苯酚，DEAE-52，葡聚糖凝胶 G150，单糖标准品：葡萄糖（Glu），鼠李糖（Rha），阿拉伯糖（Ara），木糖（Xyl），岩藻糖（Fuc），甘露糖（Man），半乳糖（Gal），标准品 T-series dextrans。小檗药材、盐酸小檗碱对照品，溴甲酚绿、溴百里香酚蓝试剂，乙腈；苍术药材、水、氯化钠、石油醚、丙酮、乙酸乙酯、5%香草醛-浓硫酸、乙醇、苍术素对照品、甲醇；水蒸汽蒸馏装置、小锥形瓶、分液漏斗、硅胶CMC板，药食同源中药材30~40种，茯茶、普洱茶原料，黄酒及白酒原酒；白及原药材，面膜/牙膏原料等。

2.仪器：微型植物粉碎机、恒温烘箱、水浴锅、旋蒸仪、真空泵、恒流泵、自动接收仪、层析柱、酶标仪、超纯水仪、透析袋、冷冻干燥机、恒温水浴锅、 GC-MS 气质联用仪、气相色谱柱（Hp-5（Agilent   19091J-413） 色谱柱（30 m×0.25 mm×320 µm））；高效液相色谱仪、Ultimate 3000 型高效液相色谱仪、 UV/V-16/18 型紫外-可见分光光度计、PHSJ-3F型实验室pH计、CP64型1/万电子天平。

牛俊峰王世强

王东浩