课 程 名 称

基因工程

课程性质

专业基础

实验技术人员

宋双红

职    称

高级实验师

授 课 方 式

多媒体教学

考试方式

实验操作及实验报告

教        材

自编

出 版 社

/

年 级

2016级

授课

专业

生物技术班

人数

80

学 时

144

周学时

12

周

授      课        内       容

教 师

6

实验一  植物RNA提取及检测

试剂与耗材：丹参组培苗、台式离心机、研钵和杵、离心管、恒温水浴锅、移液器、DNA提取试剂盒、琼脂糖、EB替代品、微波炉、电泳仪、电泳槽

曹晓燕

7

实验二  目的基因的克隆

试剂与耗材：丹参总DNA 、PCR热循环仪 、琼脂糖凝胶电泳系统、吸头、PCR管，微量移液器等

曹晓燕

8

实验三 PCR产物从琼脂糖凝胶上的回收

试剂与耗材：水浴锅、离心机、电子天平、微量移液器、琼脂糖凝胶回收试剂盒、Eppendorf管，大小枪头等

曹晓燕

9

实验四  PCR产物与T载体的连接

试剂与耗材：pGEM-T 载体、T4 DNA 连接酶、T4 DNA 连接酶缓冲液、PCR产物、离心机、PCR仪

曹晓燕

10

实验五    重组载体转化大肠杆菌

试剂与耗材：LB培养基、X-Gal、IPTG、感受态细胞DH5α、摇床，离心机、水浴锅等

曹晓燕

11

实验六    阳性克隆检测——菌落PCR

试剂与耗材： 2×PCR Master   Mix (含dNTP，Tag酶，缓冲液) 、引物、无菌水、琼脂糖、DL2000

曹晓燕

12

实验七     质粒DNA提取

试剂与耗材：具有GGPS基因质粒的大肠杆菌、质粒小量抽提试剂盒、离心机、涡旋振荡器、真空泵、水浴锅等

曹晓燕

13

实验八     质粒DNA酶切以及电泳检测

试剂与耗材：具有GGPS基因质粒的大肠杆菌、EcorRⅠ、NotⅠ、离心机、水浴锅、电泳仪、电泳槽等

曹晓燕

14

实验九    原核表达载体的构建

试剂与耗材：质粒、pQE30表达载体、eppendorf管、微量移液器、枪头等

曹晓燕

15

实验十  原核表达载体的酶切、验证及转化

试剂与耗材：质粒、pQE30表达载体、BamH I 、Hind   Ⅲ、T 4-DNA连接酶、eppendorf管、微量移液器、枪头等

曹晓燕

16

实验十一 原核表达载体的诱导表达

试剂与耗材：eppendorf管、微量移液器、枪头、IPTG，LB 培养基，Amp，Kan，SDS-上样缓冲液

曹晓燕

17

实验十二 原核表达目的蛋白的电泳检测

试剂与耗材：垂直电泳槽、电泳仪、eppendorf管、微量移液器、枪头、微量加样器、25ml烧杯、直径20cm培养皿、量筒、容量瓶、试剂瓶、单面刀片、蛋白Marker等

曹晓燕

18

实验十三 原核表达目的蛋白的分离纯化

试剂与耗材：蛋白纯化仪，蛋白Marker，纯化柱等

曹晓燕