课 程 名 称

细胞工程实验

课程性质

专业基础

实验技术人员

黄亚亚

职       称

实验师

授 课 方 式

多媒体辅助教学

考试方式

实验操作及笔试

教          材

细胞工程实验指导

出 版 社

生物技术教研室

年 级

2016

授课专业

2016生物技术

人数

76

学 时

36×4

周学时

3×4

周

日  期

实验内容及主要仪器、试剂、耗材

教师

第3周至第17周

2019.3.4

～

2019.6.22

第一部分 植物组织培养与植株再生体系的建立

（以丹参为材料）

实验目的：

1.    了解并掌握植物组织培养的研究方法与设计思路

2.    掌握植物组织培养的技术流程与操作原理

3.    了解常用的组织与细胞培养技术

实验内容：

1.    MS培养基母液的配置；

2.    培养基的配制与灭菌；

3.    外植体的消毒与接种；

4.    丹参愈伤组织的诱导与增殖；

5.    丹参愈伤组织不定芽的诱导；

6.    丹参完整再生植株的获得；

7.    花粉发育时期的鉴定与花药培养。

实验仪器及耗材、试剂：

（1）仪器设备：超净工作台、高压灭菌锅、烘箱、天平、微波炉。

（2）玻璃器皿、器械：酒精灯、镊子、解剖刀、剪刀12、pH试纸（精密4.8-9.0）、培养皿、烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、三角瓶若干、滴瓶、滴定管、玻棒、牛皮纸、称量纸、滤纸、皮筋。

（3）药品试剂：大量元素（NH₄NO₃、KNO₃、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O）、微量元素（MnSO₄·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、H₃BO₃、KI、Na₂MoO₄·2H₂O、CuSO₄·5H₂O、CoCl₂·6H₂O）、铁盐（FeSO₄·7H₂O、Na₂EDTA）、有机（甘氨酸、维生素B₁、维生素B₆、烟酸、肌醇），激素（KT、6-BA、NAA、IAA、IBA、2,4-D）、蔗糖、琼脂1‰升汞、95％酒精、70％酒精、组织培养用试剂及耗材等。

李焘

黄亚亚

第6周至第9周

2019.4.1

2019.5.4

第二部分 植物提取物对肿瘤细胞生长的影响

（以小鼠L1210细胞为材料）

实验目的：

1. 巩固并熟悉动物细胞培养基本技术

2. 了解药物处理对肿瘤细胞生长的影响

实验内容：

1.    熟悉动物细胞培养基本技术；

2. 悬浮细胞的传代培养；

3. MTT法筛选药物处理最适浓度与时间

4. 细胞生长曲线的绘制

5. 细胞的冻存与复苏

实验仪器及耗材及试剂：

材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25)、 精密pH试纸（6.8-7.2，7.0-7.4，7.4-7.8）、量筒、量筒、容量瓶、吸管。

试剂：70％或75％酒精、0.1％新洁尔灭、煤酚皂溶液(来苏儿水)、0.5％过氧乙酸、乳酸、37％甲醛、高锰酸钾、NaOH、盐酸、重铬酸钾、浓硫酸(工业) 、HEPES液、0.5％台酚蓝染液、DMEM液。

仪器：超净台、干燥箱、高压锅、过滤器、过滤泵、CO₂培养箱、显微镜。

李焘

黄亚亚