课 程 名 称

酶工程

课程性质

专业基础

实验技术人员

黄亚亚

职       称

实验师

授 课 方 式

多媒体教学

考试方式

实验操作及实验报告

教          材

自编

出 版 社

年 级

2016

授课专业

生物技术

人数

76

学 时

36×4

周学时

6×4

周

授 课 内 容 及 所 需 药 品   耗 材

教师

10

实验一 酒精发酵综合实验（综合实验 9学时，必修）

1. 酒精摇瓶实验

2. 酿酒酵母的固定化发酵

3. 固定化酿酒酵母的发酵强度测定

培养基：红糖100g，(NH₄)₂SO₄   10.0g，KH₂PO₄   5.0g，硫酸100mL，重铬酸钾5g，氢氧化钠100g，碘液10mL，生理盐水，海藻酸盐，葡萄糖，CaCl₂，等。

菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）

耗材：150mL三角瓶5个、250mL三角瓶8个，大试管（18mm×180mm）40个、杜氏小管（6mm×36mm）40个，牛皮纸3张、棉花，接种环10个，长吸管20个，滴管20个，离心管5ml 40个，500ml蒸馏瓶 5个，玻璃柱（直径约3cm、长度10cm） 2根。

仪器：培养箱，离心机

康杰芳

11

实验二  糖化酶综合实验（综合实验 12学时，必修）

1. 糖化酶摇瓶实验

2. 糖化曲中糖化酶的测定

3. 糖化酶的分离、提取

4. 糖化酶的固定

培养基：玉米粉720g, 豆饼粉240g，麸皮120g，乙酸30mL，乙酸钠67g，冰乙酸26mL，硫代硫酸钠16g，碘30g，氢氧化钠300g，硫酸20mL，淀粉，酒精，盐酸，糖化酶（液体或固体）50ml或50g，甘蔗渣 50g，β－硫酸酯乙砜基苯胺（SESA） 50g，Na₂CO₃   500g，NaNO₂ 500g，等。

菌种：黑曲霉（Aspergillus niger）

耗材：500ml三角瓶40只，纱布若干，牛皮纸若干，载玻片等50片，盖片100片，pH试纸10包，比色管（50ml）20只，容量瓶（100mL） 10只，碘量瓶20个（50或100ml），玻璃漏斗4个，布氏漏斗2个，铁架台2个，硫酸铵2000g，定性滤纸(18cm)2盒，研钵10个，无水乙醇15瓶等，滴定管酸碱各6根，布氏漏斗 4只，500ml圆底烧瓶 3个，2000ml烧杯 3个，石棉网 6个，烧结玻璃漏斗 5个，砂心漏斗 5个，100ml   烧杯 10个。

仪器：培养箱，恒温水浴锅，旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂 RE-52CS   2988元），抽滤泵。

康杰芳

12-13

实验三山茱萸不同提取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用的比较                   （综合实验 12学时，必修）

1. 山茱萸不同提取部位提取物的获得；

2. α-淀粉酶活力的测定

3.α-葡萄糖苷酶酶活力测定；

4.   酶抑制率的测定；

5.   IC50值的计算；

6. 四个部位抑制效果的比较；

耗 材： 分液漏斗250mL 20个，试管 10mL200个，

仪器：超声波清洗仪，旋转蒸发仪，恒温水浴槽，可见光分光光度计

康杰芳

15

实验四  酶联免疫吸附测定法（基础实验 3学时，必修）

耗材：乙肝酶联免疫法试剂盒（上海科华 乙肝五项 48人份280元，西安天隆待售），辣根过氧化物酶标抗抗体，碳酸钠，碳酸氢钠，NaN_3，磷酸二氢钾，磷酸氢二纳，氯化钠，氯化钾，Tween-20，牛血清白蛋白溶液，柠檬酸，邻苯二胺，硫酸，过氧化氢，聚苯乙烯微孔测定板，微量注射器，pH试纸。

康杰芳

15-17

实验五  酶促反应动力学综合实验  （综合实验 12学时，必修）

1.初速度时间范围测定

2. pH对酶活力的影响

3. 温度对酶活力的影响

4. 米氏常数和最大反应速度的测定

耗 材：绿豆芽2斤，研钵10个，纱布若干，透析袋（分子接流量3000kDa）5米，酸性磷酸酯酶原酶液 100ml（或用复方磷酸酯酶肠溶片替代），柠檬酸150g，柠檬酸钠180g，pH试纸(1-14精密试纸)5包，对-硝基苯磷酸酯（NPP）80g，NaOH 24g, 试管(20mL)100只,试管架10个，刻度吸管30只, KH2PO4 4g，NaF 8g。

仪器：恒温水浴槽，可见光分光光度计

康杰芳

16-18

实验六  超氧化物歧化酶的分离、纯化（综合实验 12学时，选修）

1. 超氧化物歧化酶的活性测定

2. 动物血中超氧化物歧化酶的提取

3. 离子交换层析纯化超氧化物歧化酶

4. 金属螯合层析分离纯化超氧化物歧化酶

所需药品耗材：

新鲜猪血，Tris 15g，EDTA-2Na 2g，HCl 100mL，邻苯三酚 2g，20mL试管20只，刻度吸管10只，微量注射器10只，pH试纸，容量瓶，石英比色杯2只，柠檬酸三钠 3.8g，氯化钠1.8g，95%乙醇500mL，氯仿400mL，丙酮500mL，K₂HPO₄ 80g，KH₂PO₄ 60g，NaOH  40g ,DEAE-Sephadex   A-50 100g ，烧杯10个，布氏漏斗4个，抽滤瓶4个，量筒10个，搅棒10个，透析袋，pH试纸，DE-32 100g，层析柱10个，部分收集器10个，梯度洗脱仪10个，试管10个，铁架台10个，螺旋夹10个，塑料管，琼脂糖40g，亚氨基二乙酸（IDA） 20g，环氧氯丙烷60mL，三羟甲基氨基甲烷（Tris），氢氧化钠，硼氢化钠2g，Na₂CO₃ 22g，NaHCO₃ 2g，20~30目金属网筛1个。

康杰芳

17-19

实验七  胰蛋白酶及其抑止剂的分离、纯化（综合实验 12学时，选修）

1. 胰蛋白酶活性测定

2. 胰蛋白酶的提取

3. 胰蛋白酶的纯化

4. 胰蛋白酶抑止剂的制备

所 需 药   品 耗 材：新鲜胰脏或冷冻猪胰脏，新鲜鸡蛋80个，酪蛋白2g，三氯乙酸50mL，盐酸50mL，N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE） 1g，酪氨酸，结晶胰蛋白酶，大试管30个，石英比色杯（带盖）2个，乙酸10mL，硫酸10mL，固体硫酸铵，无水CaCl₂ ，95%乙醇，NaOH，丙酮，透析袋，20目筛网1个，纱布若干，烧杯10个，量筒10个，刻度吸管10个，大试管30个，玻璃漏斗10个，布氏漏斗4个，抽滤瓶4个，温度计10个，滴管20个，玻璃搅棒10个， pH试纸，琼脂糖40g，卵粘蛋白，环氧氯丙烷60mL，碳酸钠30g ，对β-硫酸酯乙砜基苯胺20g，碳酸氢钠 30g，Tris   500g，HCl 100mL，甘氨酸1g， NaBH₄ 1g,NaNO₂ 20g,1，层析柱10个，铁架台10个，螺旋夹10个，橡胶管2米，三角烧瓶10个，等。

康杰芳