课程名称

生物检测技术实践

课程性质

专业基础

实验技术人员

王世强、王东浩

职称

实验师

授课方式

多媒体辅助教学

考试方式

实验操作及实验报告

教材

--

出版社

--

年级

2017级

授课

专业

生物技术

人数

76

学时

36

周学时

3

周

日期

实验内容及所用药品和仪器

教师

第3周

9.16-9.22

实验1  PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌（基础实验）

实验目的：

掌握PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌具体方法及操作步骤。

实验仪器及耗材、试剂：

1．耗材和试剂：菌种：Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)－26003-21；乳制品：全脂乳、脱脂乳和奶酪；营养肉汤培养基；10xPCR   buffer、dNTPs、TaKaRaTaq、DNA Marker DL2000，

；引物：正向引物：GCGATTGATGGTGATACGGTT           

反向引物：AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC  

2．实验仪器：PCR仪、DXY-33A型电泳仪、UVIpro凝胶成像系统

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第4周

9.23-9.29

实验2  荧光定量PCR检测方法快速检测沙门氏菌（基础实验）

实验目的：

掌握荧光定量PCR检测方法快速检测沙门氏菌的具体方法及操作步骤。

实验仪器及耗材、试剂：

1．耗材和试剂：1.沙门氏菌阳性菌株，2.沙门氏菌核酸检测试剂盒（PCR-探针法），3．乳制品：全脂乳、脱脂乳和奶酪购自当地超市。

2．实验仪器：实时荧光 PCR 仪：；恒温培养箱、离心机（2mL、5mL、7mL）、掌式离心机（0.2mL 8 联管）、金属浴、涡旋混合器、移液器（10μL、100μL、1000μL）及吸头、离心管（2mL、5mL、7mL）、PCR 反应管（0.2mL）等。

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第6周

10.07-10.13

实验3兰科植物种子活力检测（基础实验）

实验目的：

了解TTC染色原理；掌握兰科植物种子染色操作；掌握体视显微镜计数种子活力。

实验仪器及耗材、试剂：

1.耗材和试剂：实验材料为各种兰科植物种子，TTC，番红，醋酸洋红，培养皿，载玻片，盖玻片，毛笔，尼龙网，

2．实验仪器：体视显微镜

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第7周

10.14-10.20

实验4面膜制品制样及荧光剂的检测（基础实验）

实验目的：

掌握伍德灯照射法和分光光度法检测面膜类制品中荧光增白剂的含量。

实验仪器及耗材、试剂：

1．市售各种面膜样品、二苯乙烯性荧光增白剂VBL,CXT和BA标品、荧光染色剂0.1% Calcofluor White   Stain；盐酸、氢氧化钠

2. 海伍德紫外灯、荧光性分光光度计、超纯水仪。

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第8周

10.21-10.27

实验5植物基因组大小的检测（流式细胞仪)（基础实验）

实验目的：

了解流式细胞仪工作原理；掌握植物细胞核提取方法。

实验仪器及耗材、试剂：

1.材料：为新鲜植物叶片，其中对照植物选择丹参的新鲜叶片。

2.仪器及耗材：流式细胞仪，冰箱，培养皿，制冰机，刀片，锡纸，移液枪，OttoⅠ提取液，LB01提取液。

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第9周至第10周

10.28-11.10

实验6 药用植物中有效成分的提取与检测（HPLC）（综合实验）

实验目的：

掌握《2015版药典》中苍术素的提取方法；掌握苍术素标准曲线的绘制；了解HPLC的操作。

实验仪器及耗材、试剂：

1.试剂：甲醇，混合纤维素酯膜微孔滤膜（0.45μm）；苍术素对照品；不同产地的苍术药材。

2.仪器：高效液相色谱仪，C18柱，超声波清洗器，电子天平，药材粉碎机，三号筛子，置具塞锥形瓶。

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第11周至第12周

11.11-11.24

实验7激素处理前后植物中游离氨基酸的含量检测（综合实验）

实验目的：

(1)掌握氨基酸分析仪的检测原理；掌握植物样品中游离氨基酸的提取方法和注意事项；掌握样品处理的基本原则和方法；了解氨基酸分析仪的操作；了解激素对植物代谢的影响；掌握数据的显著性差异分析方法。

实验仪器及耗材、试剂：

1．标样:Type H、TypeB、Type AN-Ⅱ氨基酸混标( 日本和光纯)、茚三酮、水杨酸、丹参种子；黄曲霉素M 1 和黄曲霉素 M 2标样各1支，乙腈（色谱纯，Merk）4L、甲醇（色谱纯，Merk）4L、乙酸铵（色谱纯，sigma）

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩

第13周至第15周

11.25-12.15

实验8药用植物中生物碱的提取与检测（设计实验）

实验目的：

石斛生物碱的提取、分离、纯化与鉴定；

实验所需耗材和仪器：

1.石斛碱对照品，溴甲酚绿、溴百里香酚蓝试剂，乙腈( 色谱纯)，其他试剂均为分析纯。

2.仪器：Ultimate 3000 型高效液相色谱仪， UV/V-16/18 型紫外-可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)，PHSJ-3F型实验室pH计(上海精科)，CP64型1/万电子天平(奥豪斯有限公司)。

康杰芳

牛俊峰

王世强

王东浩